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免疫组化操作流程(适用于石蜡切片)

发布时间:2016-08-06
摘要:Power-StainTM 1.0/HRP免疫组化操作流程(适用于石蜡切片)

Power-StainTM 1.0/HRP免疫组化操作流程(适用于石蜡切片)

1、  编号:在已处理玻片上注明抗体名称和病例号。

2、  烤片:将切片放入不锈钢切片架上,放入恒温鼓风干燥箱(68度)过夜。(组织与玻片很好的结合,不易掉片)或751小时。(取出后趁热立即脱蜡)。

3、 脱蜡:

a.  二甲苯I IIIII10分钟

b.  无水乙醇I IIIII2分钟

c.  95%乙醇I II2分钟

d.  80%乙醇2分钟

自来水、蒸馏水冲洗(20秒),PBS冲洗2分钟/3次。

4、  抗原修复:

1)微波修复:

首先预热修复液4-5分钟。修复时把片子放入灰色修复盒里先修复10分钟,(用80%的火力)。

观察修复液面是否没过切片组织。再适量加入修复液修复10分钟,(用80%的火力),取出后自然冷却至室温,切片不能从修复液中取出。把修复过的片子放入PBS2分钟/3次。

B)高压修复:

首先预热修复液至沸腾,然后放入切片,上气后计算时间(230秒)自然冷却,也可用冷水冲洗高压锅减压后开盖,自然冷却至室温。把修复过的片子放入PBS2分钟/3次。

C)水浴锅修复:

首先预热修复液,保持在95-98,放切片架上修复20-25分钟,自然冷却. 把修复过的片子放入PBS2分钟/3次。

注:根据抗体说明书选择相应的修复条件。

5、 淬灭

3%过氧化氢10分钟,灭活内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗2分钟/3次。

6、滴加一抗:

将组织周围的水分擦干,片子底部水分也要擦干净(利于观察)。放入湿盒,滴加一抗,(注意组织周围的边缘也要加好)。室温1小时(室温不低于20度)或4℃冰箱过夜。

PBS冲洗,2分钟/3次。

6、滴加二抗:

滴加二抗,室温15-20分钟,PBS冲洗,2分钟/3

7、显色:

DAB20倍稀释(1DAB20滴稀释液混匀),显色5分钟,自来水冲净,终止显色。

8、复染:

苏木素液中半分钟至1分钟(视苏木素陈旧程度)    自来水冲洗    盐酸酒精分色(2秒钟)  自来水冲洗(1分钟)  氨水(2秒)   自来水冲洗。

9、脱水透明:

a.  80%乙醇2分钟

b.  95%乙醇I II2分钟

c.  无水乙醇I II2分钟

d.  二甲苯I IIIII10分钟

10、封片

封片胶封片,封片时不能有气泡,以免影响镜下观察。

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