Power-StainTM 1.0/HRP免疫组化操作流程(适用于石蜡切片)
1、 编号:在已处理玻片上注明抗体名称和病例号。
2、 烤片:将切片放入不锈钢切片架上,放入恒温鼓风干燥箱(68度)过夜。(组织与玻片很好的结合,不易掉片)或75度1小时。(取出后趁热立即脱蜡)。
3、 脱蜡:
a. 二甲苯I、 II、III各10分钟
b. 无水乙醇I、 II、III各2分钟
c. 95%乙醇I、 II各2分钟
d. 80%乙醇2分钟
自来水、蒸馏水冲洗(20秒),PBS冲洗2分钟/3次。
4、 抗原修复:
1)微波修复:
首先预热修复液4-5分钟。修复时把片子放入灰色修复盒里先修复10分钟,(用80%的火力)。
观察修复液面是否没过切片组织。再适量加入修复液修复10分钟,(用80%的火力),取出后自然冷却至室温,切片不能从修复液中取出。把修复过的片子放入PBS中2分钟/3次。
B)高压修复:
首先预热修复液至沸腾,然后放入切片,上气后计算时间(2分30秒)自然冷却,也可用冷水冲洗高压锅减压后开盖,自然冷却至室温。把修复过的片子放入PBS中2分钟/3次。
C)水浴锅修复:
首先预热修复液,保持在95-98度,放切片架上修复20-25分钟,自然冷却. 把修复过的片子放入PBS中2分钟/3次。
注:根据抗体说明书选择相应的修复条件。
5、 淬灭
3%过氧化氢10分钟,灭活内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗2分钟/3次。
6、滴加一抗:
将组织周围的水分擦干,片子底部水分也要擦干净(利于观察)。放入湿盒,滴加一抗,(注意组织周围的边缘也要加好)。室温1小时(室温不低于20度)或4℃冰箱过夜。
PBS冲洗,2分钟/3次。
6、滴加二抗:
滴加二抗,室温15-20分钟,PBS冲洗,2分钟/3次
7、显色:
DAB:20倍稀释(1滴DAB,20滴稀释液混匀),显色5分钟,自来水冲净,终止显色。
8、复染:
苏木素液中半分钟至1分钟(视苏木素陈旧程度) 自来水冲洗 盐酸酒精分色(2秒钟) 自来水冲洗(1分钟) 氨水(2秒) 自来水冲洗。
9、脱水透明:
a. 80%乙醇2分钟
b. 95%乙醇I、 II各2分钟
c. 无水乙醇I、 II各2分钟
d. 二甲苯I、 II、III各10分钟
10、封片
封片胶封片,封片时不能有气泡,以免影响镜下观察。